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更新时间:2024-12-12
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ELISA实验广泛应用于抗体检测,这些实验中没有考虑样本中蛋白与ELISA板表面结合引起的假阳性。在这些非特性反应中,检测抗体的空白值被所有客户考虑到,但是样本本身的空白值常备客户忽略。背景反应依赖于样本本身。如果不考虑样本的背景反应,背景反应值也会计入读数,出现很多不确定的结果。因此必须认识到ELISA实验中各种假阳性以得到真实的数据。
对于抗原包被的试剂盒,低稀释比的血清,其背景值会很高,会超出抗原-抗体反应。通过设置无抗原包被孔(None),很容易测定背景效应。
注:降低试剂盒灵敏度并不能降低低背景反应。
Chondrex公司研制的封闭液(ChonBlock™),能够有效阻止抗体检测试剂盒中的非特异性反应,不影响试剂盒本身的抗原抗体反应。该封闭液被广泛用于抗体检测试剂盒,例如:人或动物血清致病因子,疫苗及自身免疫疾病研究检测等。
关节炎病人血清样本(1/10~1/640)用不同的封闭液稀释稀释,加入检测板,用抗人IgG-HRP标记抗体检测结果对比,结果显示ChonBlock™能够有效封闭背景效应,而其他缓冲液系统都达不到以上效果。
13例正常人血清样本和13例关节炎血清样本1/500用以下稀释液稀释稀释。a)RIA-10% NGS b)ChonBlock™封闭液,加入到Glycine对照多肽,CCP孔。CCP孔真实的OD值检测值:减去背景OD值(Glycine对照孔)。
注:RIA-10% NGS缓冲液系统,由于背景效应太高,测不到抗CCP抗体。
Chondrex ELISA封闭液/样本稀释液/阻断剂订购:
中文名称 | 英文名称 | 货号 | 规格 |
封闭/样本稀释液 | Blocking/Sample/Dilution Buffer | 9068 | 100ml |
检测抗体稀释液 | Detection Antibody Dilution Buffer | 90681 | 100ml |
参考文献
1. Terato et al. Preventing intense false positive and negative reactions attributed to the principle of ELISA to reinvestigate antibody studies in autoimmune diseases. J. Immunol. Methods 407, 15-25 (2014).