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天狼猩红总胶原检测试剂盒一级代理

发布时间:2021/1/15点击次数:756

    天狼猩红总胶原检测试剂盒

    Sirius Red Total Collagen Detection Assay KitCatalog # 9062

    仅用于科研,不可用于诊断

     产品说明:

    产品描述:用于检测样本中的总胶原

    形式:96孔可拆版

    检测方法:比色法

    实验时间:30min

    检测范围500 µg/ml to 8 µg/m

    检测数量:40(复孔)样本/

    样本类型:组织匀浆、细胞培养液、细胞

    样本稀释比:根据样本类型而定

    发色团:N/A(510-550nm读取)

    保存:-20 保存12个月

    试剂盒组成:

     

    组分

    数量

    规格

    保存温度

    标准品-II型胶原(90621

    1

    0.5 mg/ml, 1 ml

    -20°C

    天狼猩红溶液(90622

    1

    50 ml

    -20°C

    洗液(90623

    1

    50 ml

    -20°C

    提取液(90624

    1

    30 ml

    -20°C

    0.5M醋酸(10X醋酸)(90625

    1

    20ml

    -20°C

    96孔板(9026

    1

    8-well strips x 12

    -20°C

     

    注:1)洗液,提取液,0.5M的醋酸和96孔板也可以室温保存

    2)用于细胞培养液样本的的浓缩液(50 ml, Catalog # 90626))不包括在盒子内,需要单独订购。

     

    样本制备:

    可用于检测组织匀浆样本和细胞。固体样本需要溶解后检测。此外,细胞培养液需要做浓缩处理(请参照第三页实验步骤)。另外,热变性的胶原对天狼猩红的结合性差,会导致结果值偏低。

    依据溶解缓冲液的不同,以下胶原样本可用于检测:

    1. 中性缓冲液溶解的胶原溶液(0.15mol/L NaCl in 0.1M Tris-HCl, pH 7.4
    2. 醋酸溶解的胶原溶液(0.05mol/L的醋酸)
    3. 含胃蛋白酶的胶原溶液(0.05mol/L的醋酸,含胃蛋白酶)

    Chondrex 推荐“制备含胃蛋白酶的可溶液胶原溶液”制备方案,详情请咨询博蕾德。

    细胞培养液样本制备:

    含高浓度血清的细胞培养物会导致高背景值。因此,我们推荐用PBS降低细胞培养物中的血清浓度到5%

    样本浓缩:

    细胞培养物中的血清浓度一般来说很低,因此用试剂盒直接检测细胞培养物中的胶原很难检测得到。Chondrex公司通过浓缩液(Cat # 90626)参照样本浓缩流程对样本进行浓缩。如果检测细胞培养物,请设置阴性对照,用浓缩液的话可能会导致背景升高。

    1. 加入1ml细胞培养液
    2. 加入250ul浓缩缓冲液
    3. 涡旋混匀后,4℃孵育16-24小时
    4. 10000rpm离心3min
    5. 弃上清液
    6. 加入100ul 0.05mol/L的醋酸溶解沉淀物。用溶解后的样本,作为检测样本。
    7. 样本中胶原浓度为测定值x0.1

    操作流程:

    1. 加入100ul稀释后的标准品和样本到管内。
    2. 加入500ul天狼猩红溶液到管内
    3. 混匀后,室温孵育20min,10000rmp离心3min,小心吸取上清,并弃上清。
    4. 加入250ul提取液到各管内。
    5. 涡旋混匀使沉淀物*溶解。
    6. 从各管内取200ul到检测板
    7. 读取530nm(510-550nm)吸光度值  

    注意:

    1. 推荐标准品和样本均做复孔检测
    2. 所有的缓冲液在用前置于室温平衡。
    3. 用移液管准确定量缓冲液体积,提供的缓冲液都是足量的。
    4. 如果一次用不完的原液试剂,请还在原瓶内-20℃保存,用于后续实验。
    5. 试剂盒含有未感染的动物的动物组分,丢弃请做生物安全处理。

     实验流程:

    1. 1X醋酸溶液制备:用双蒸水,制备足够的1X醋酸溶液(0.05M)。
    2. 标准品制备:用1.5ml离心管或者细胞培养管制备标准品溶液,加入250ul 0.05mol/L的醋酸(空白)到7管内。加入250ul标准品(500ug/ml)和等体积的0.05mol/L的醋酸混合(250ug/ml)。一次重复此步骤,制备:125,63,31.5,16,和8ug/ml标准品溶液
    3. 样本制备:1.5ml离心管或者细胞培养管制备样本溶液。如果样本中的胶原浓度范围不确定,需要用0.05mol/L的醋酸溶液做系列稀释后,确定样本大概范围后再检测。
    4. 加入样本和标准品:加入100ul ,空白,稀释后的标准品和样本到离心管内,做复管。
    5. 加入天狼猩红溶液:加入500ul天狼猩红溶液到各管。涡旋混匀,室温孵育20min
    6. 离心:10000rpm离心3min。去除上清,不要接触底部的沉淀物。如果不小心接触到,重新离心,小心去除上清。
    7. 加入洗液:加入500ul洗液到各管。涡旋混匀后,重悬沉淀物。
    8. 离心:10000rpm离心3min。去除上清,不要接触底部的沉淀物。如果不小心接触到,重新离心,小心去除上清。
    9. 加入提取液:加入250ul提取液到各管。涡旋混匀后,充分溶解。
    10. 读数:从各管取200ul96孔板。读取510-550nm的吸光度值

     结果计算:

    1. 计算标准品,空白和检测样本的OD平均值。
    2. 用标准品和样本OD平均值减去空白OD均值。
    3. Y轴做OD值,X轴做标准品浓度,制作标准曲线。
    4. 通过回归曲线计算样本浓度。样本实际浓度应在测值的基础上乘以相应的稀释倍数。
    5. 如果OD值超出标准品检测范围,请对样本做稀释后,再检测。
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