CRISPR/Cas9 质粒-New

Santa Cruz 新品- CRISPR/Cas9 质粒-New

一 CRISPR/Cas9基因敲除质粒

1）每个Knockout 质粒产品设计为3个质粒，确保对特定基因识别和剪切效率达到zui大。每个质粒编码*的20个核苷酸，序列来自GeCKO文库。

2）Cas9/gRNA 复合体与靶DNA 的PAM（NGG）位点结合，并解旋DNA

gRNA与PAM位点附件的靶位点特异结合。

3）通过3个gRNA的向导，Cas9在3个特定位点对目的基因的5’外显子进行剪切。

二、HDR 同源修复质粒

1）每个HDR产品包含了3种质粒，这三种质粒对相应的CRISPR/Cas9敲除质粒导致的缺口特异性修复。

2）HDR质粒为DSB提供特定的修复模板

3）每个HDR质粒包含两个800碱基对同源臂，可特异的与相应的cas9诱导的双链DNA破坏位点周围的基因组DNA结合。

4）与敲除质粒共转染时，HDR质粒的puro基因，用于筛选稳定的敲除克隆。

5）每个嘌呤霉素抗性基因两侧各有一个Loxp位点，便于Cre载体进一步处理。

三、双切口酶质粒（Double Nickase Plasmids）

1）每个双切口酶质粒由一对各自编码 D10A突变型Cas9核酸酶和特异性20nt 组成，与CRISPR/Cas9敲除质粒相比，具有更高的特异性。

2）成对gRNA序列设计为大约5-20个碱基对的偏移，所形成的DNA双切口被识别为功能性双链断裂。

3）每个casn/sgNA复合物在与向导RNA互补的DNA链仅产生一个切口。

4）使用成对的向导RNA可提高特异性且可zui低化脱靶效应。

四、CRISPR/dCas 激活质粒

1）用于激活內源基因的表达。包含三种质粒，几个修饰组件形成协同激活介质（SAM）复合体，这个SAM复合体代表了迄今为止，zui有效的转录激活系统。