ELISA操作常见问题和解决方法

更新时间：2015-09-23

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ELISA操作常见问题和解决方法

ELISA即酶联免疫吸附实验，是目前广泛应用于各种抗原抗体检测的方法，主要有灵敏度高和特异性强的特点。ELISA操作步骤看似简单，整个测定过程中却有诸多影响因素，导致检测结果可能与实际结果偏差较大。为帮助大家分析实验中常见问题，我们将常见问题的可能原因和解决方法归纳总结于下表：

问题一：高背景或阴性对照值偏高

可能原因	建议
阴性对照孔被阳性对照或样品污染	洗涤时，勿将洗液溢出孔外。
洗涤不充分	确保在洗涤时每个孔都充满了液体，确保将残余液体从孔中移除。
酶结合物过浓	请检查酶结合物是否按说明书规定稀释
孵育温度过高	检查孵育箱的温度是否正确、稳定
底物在使用前曝光	应保存在暗处，避光。
读板前停留时间过长	加终止液后3分钟内读数

问题二：阳性对照值偏低或低吸光度

问题三：边缘效应

问题四：标准曲线不佳

可能原因	建议
倍比稀释标准品时未混匀	稀释标准品的每一步均需混匀
过早稀释	标准品在快要使用时稀释
加入的体积不正确	使用校准过的移液器，快速、等量的将标准品分配到各个微孔中

问题五：标准曲标准曲线良好，但样本无检测信号

可能原因	建议
样本中无检测物或检测物含量极低	设置内参，重新实验
样本中其他物质影响/掩盖检测	作适当稀释，降低其他物质的干扰，或作系列稀释，检测回收率。
样本中检测物浓度过高，Hook效应导致假低值	适当倍数稀释样本，检测物浓度尽量在试剂盒检测范围内。

问题六：重复性较差