25-羟基维生素D ELISA检测试剂盒

25-羟基维生素D ELISA检测试剂盒

生产厂家：Calbiotech

货号：VD220B 

应用

25-羟基维生素D检测试剂盒用于定量检测人血清中总的25-羟基维生素D含量。

背景简介：

25-羟基维生素D是激活维持肠内钙吸收和平衡的一类甾类激素。维生素D 有两个亚型：维生素D2和维生素D3。维生素D2来源于乳制品，而维生素D3在来源日光照射后的皮肤。在肝脏内维生素D 碳25位置发生羟基化，形成25羟基维生素D。25羟基维生素D是维生素D的主要代谢循环产物，被广泛认为是反应个体维生素D水平的准确的标记物。多种疾病与维生素缺乏相关：如骨质疏松症、佝偻病、软骨病、癌症以及多种心血管疾病。通过饮食补充的维生素D2和维生素D3都在肝脏中转化为25-羟基维生素D。血清或血浆中的25羟基维生素D2和D3的总浓度为被认为25羟基维生素D的总量。维生素D缺乏的患者应经常检测血清或血浆中的25-羟基维生素D含量，通过补充维生素D使维生素D含量达到*水平，同时避免因过量补充维生素D引起维生素D水平超标。

检测原理：

试剂盒采用竞争ELSIA 检测方法。包被有维生素D的96孔板与标准品、对照、检测样本和生物素标记的维生素D室温孵育90min。孵育过程中，生物素标记的维生素D与样品、标准品及质控中的维生素D竞争结合包被的维生素D抗体。洗涤后，通过HRP标记的链亲合素（SA-HRP）与结合的生物素标记的维生素D反应，连检测维生素D含量。样本中的维生素D含量越高，生物素标记的维生素D含量越少。未结合的SA-HRP在被洗掉，加入TMB 室温孵育30min，有蓝色出现。加入终止液，读取450nm吸光度。用吸光度和和标准品浓度做标准曲线。颜色深浅与25-OH维生素D含量成反比关系。整个过程为2.5小时。

样本收集和处理

血清样本-通过静脉采血，血块凝集后，尽快分离血清。请不要用溶血的样本。

新鲜血清可在2-8℃储存两周。长期保存，请在-20℃一下保存，避免反复冻融。测定前，样本需置于室温平衡30min。

试剂制备：

检测前请提前制备以下试剂：

1. 标准品和试剂：

血清为即用型，用前请在室温平衡。

1. 51X生物素标记：用前稀释，用稀释液制备1X工作稀释液（例如：5ml稀释液中加入：0.1ml 51X的生物素标记的VitaminD），剩余的稀释液应置于2-8℃避光，封闭保存。
2. 制备1X洗涤缓冲液：20X稀释液(25ml)，加入475ml蒸馏水。室温保存（18-24℃。）

操作程序：

所有的样本和检测试剂在用前都需室温平衡。

1. 标准品，对照，样本加入10ul到对应孔。
2. 加入200 ul 生物素标记的25-OH维生素到各孔。
3. 振板仪200-400rpm 振板20s，充分混匀。用封板膜封板。
4. 封板后，室温孵育90min。
5. 去掉封板膜。
6. 倒掉孔内液体。
7. 洗涤：加入300ul1X洗涤缓冲液到各孔，然后倒掉，在吸水纸上拍干。重复洗涤三次。
8. 加入200ul Streptavdin-HRP到各孔。
9. 室温孵育30min。
10. 倒掉孔内液体。
11. 洗涤：加入300ul1X洗涤缓冲液到各孔，然后倒掉，在吸水纸上拍干。重复洗涤三次。
12. 用排枪加入：200ul TMB到各孔。
13. 室温避光孵育30min。
14. 终止：加入50ul终止液终止反应。轻轻混匀20-30s。
15. 加入终止液10分钟内，读取450nm吸光度。

标准曲线：

试剂盒参数：

1.精密度

批内差异：

批间差异：

2.灵敏度

试剂盒灵敏度为：0.67ng/ml。

1. 检测范围

 健康人群 15-60ng/ml (血清)，建议各个实验室依据检测群体的特殊性，确定各自的正常值范围。

其他：（供参考）

质控

推荐使用质控品来检测试剂盒系统。

结果：

结果以ng/ml表示，如要转换成nmol/L,检测结果x2.5，例如：10ng/ml=25nmol/L。