全血基因组提取试剂盒

 

 

本试剂盒通过裂解红细胞、裂解白细胞及细胞核、沉淀蛋白、分离基因组等过程从全血中提取基因组。试剂盒特点：提取的基因组DNA长度大于20kb, 可用于PCR扩增、内切酶消化以及膜杂交等；每100ul全血样品预期提取量1-5ug；所提基因组DNA效果好；提取过程不超过45分钟；可室温保存1年。与全血基因组提取试剂盒（I）不同的是裂解红细胞及有核白细胞同时进行，省去了多个步骤，复合裂解液中含有抑制DNA酶的成分，在加热（65°C）状态下，可保证完整的基因组DNA的充分裂解释放，异丙醇沉淀时，罕见浑浊的蛋白质杂质共沉淀。本试剂盒提供100次100ul全血样本基因组提取的足量试剂。 本试剂盒也可用于培养细胞，组织基因组以及培养细菌或真菌基因组DNA的提取。

 

1、细胞复合裂解液：35ml                            2、蛋白沉淀液： 25ml×1瓶

3、DNA溶解液： 5ml瓶                                4、说明书： 1份

本试剂盒没有提供，但*的试剂包括：异丙醇（国产分析醇）；70%乙醇。

样品

1、 样品要求：用于DNA提取的全血应为抗凝血（EDTA, 肝素或柠檬酸钠抗凝），抗凝血在4°C存放5天以内（存放时间长，DNA产量低），-20°C存放一个月以内, -80°C至少可存放2年均能纯化出高质量的DNA（冻存血较新鲜血产量低）。

2、 全血需求量：本试剂盒可一次提取少至20-300ul,多至10ml的全血DNA,标准提取量为100ul。

 

注：血液及组织标本应视为传染性材料处理。

操作程序（以100ul全血为例）

1、 细胞复合裂解液置65°C水浴中使其中的结晶溶解。

2、 吸取100ul混匀的全血至1.5ml离心管中，加入结晶成分已溶解的细胞复合裂解液300ul，混璇器震荡混匀20秒，置65°C水浴中反应20分钟。

3、 加入200ul蛋白沉淀液，上下颠倒5-6次使两者混匀。

4、 13000-16000×g，离心3-5分钟。

 

5、 将上清液（约500ul）转移至新的离心管中，加入等体积异丙醇，此时可见透明的絮状物，混匀后离心，同步骤4，倾去上清。

6、 加入200ul 70%的乙醇溶液（基因组DNA在70%乙醇中，存于-80　C，可长期保存），来回倒置，清洗管壁，离心，同步骤4。

7、 移去70%乙醇，倒置离心管于干净的滤纸上，自然干燥10-15分钟，加入33ul DNA溶解液。快速漩涡震荡1-2秒，使DNA溶解液冲刷到所有沉淀的DNA。

8、 65　C水浴1小时，或4　C过夜使DNA充分溶解（要求不严格的PCR试验可缩短时间或省去该步），轻轻弹动管壁有助于溶解。

 

 

 

全血量	复合裂解液量	蛋白沉淀液量	异丙醇量	70%乙醇量	DNA溶解液量
100 ul	300 ul	200 ul	500 ul	200 ul	33 ul
300ul	3x300 ul	3x 200 ul	3x500ul	3x200ul	3x33 ul