大鼠自身免疫性肾小球肾炎模型诱导方案

大鼠自身免疫性肾小球肾炎模型诱导

背景简介：

Goodpasture综合征是一种由肾脏和肺部针对肾小球基底膜（GBM）的自身抗体引起的自身免疫性疾病，表现为严重的肾脏疾病和肺出血。患者自身抗体识别IV型胶原（NC1）α链（α1-α6）的非胶原结构域，该结构域包含GBM。更具体地说，主要的Goodpasture抗原在人类中被鉴定为IV型胶原α3链的NC1结构域[α3（IV）NC1]，并在几种动物模型中得到证实。此外，Kohda等人报告称，通过用重组α4（IV）NC1片段免疫Wistar Kyoto（WKY）大鼠或免疫抗α4（IV）NC1抗体，可以在WKY大鼠中诱导这种疾病模型。

为了诱导大鼠实验性自身免疫性肾小球肾炎，Chondrex提供了两种免疫方案，分别为抗IV型胶原NC1片段抗体和IV型胶原NC1片段诱导的肾炎。大鼠抗α4（IV）NC1单克隆抗体可以通过单次腹腔（IP）或静脉（IV）注射诱导肾炎。Chondrex，股份有限公司还提供小鼠和大鼠肾NC1片段作为ELISA抗原，以量化自身抗体对免疫牛NC1片段的交叉反应性。

操作流程：

IV型胶原NC1片段诱导的大鼠肾小球肾炎

1）动物选择：7-8周龄WKY品系大鼠。对模型的敏感性与WKY大鼠亚系，供应商和实验设施有关。

2）免疫原：用1ml 0.05mol/L的PBS （Ph7.4）溶解IV型胶原NC1片段（cat#1102,1mg）

3）乳剂制备：用IV型胶原NC1片段与弗氏佐剂（CFA, 1mg/ml,cat#7008）等体积混合制备乳剂。

注意：乳剂混完后，滴一滴到水中检测乳剂质量，如果散开表明质量不好，需要重新制备

4）免疫：大鼠尾根部皮下注射200ul制备好的乳剂。

注意：第七天加强免疫对一些低敏感品系，诱发肾炎模型是有效的。如果加强免疫应该用IFA佐剂和IV型胶原NC1片段配成的乳剂去诱导，而不是CFA佐剂，尾根部皮下免疫200ul。研究者应优化实验条件，比如免疫时间，剂量和供应商等。

5）模型评估：

免疫后，建议观察大鼠至35天。每周进行16小时蛋白尿评估，以确认肾炎模型的严重程度。推荐使用Chondrex 大鼠尿蛋白检测试剂盒（cat#9040）,进行蛋白尿测定。易感WKY大鼠的蛋白尿在14-21天可以检测到，在21-28天达到高峰。

WKY 大鼠（雌性，7周）免疫IV型胶原NC1片段和CFA配成的乳剂后，尿蛋白水平变化，从第10天检测到蛋白尿，持续到第28天。

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