破骨细胞骨吸收检测操作流程

骨切片Bone Slice

产品描述：

开始骨吸收实验前用培养基重悬骨切片，成熟或早熟的破骨细胞，无论是由外周血单核细胞（PBMC）或共培养产生的，都可以将细胞分散覆盖于骨切片上。根据破骨细胞的成熟形态和影响因素，凹点会在3-14天出现。破骨细胞数量可通过Tracp 活性实验来观察，吸收凹点和沟可通过甲苯蓝染色观察（如图2.）。

来源：骨切片由牛股骨的皮质部分制成，适合96孔板，直径6mm。

厚度：1）0.2mm（适用于免疫荧光，共聚焦实验）。
        2）0.4mm（适用于下游分析）
储存：置于4°C下96%乙醇中。
应用：用于骨吸收实验检测，通过破骨细胞的骨吸收形成的吸收坑，可以用来监测培养的破骨细胞的骨吸收情况，适合96孔板。

操作流程：

骨吸收实验

简介：

该方法提供一种易于检测的定量方案，用于体外测定破骨细胞介导的骨吸收。破骨细胞接种于骨切片上，吸收坑的形成可以通过甲苯胺蓝染色进行定量。

实验材料和试剂：

1）  破骨细胞

2）  骨切片

3）  异丙醇

4）  甲苯胺蓝（Sigma cat#198161）

5）  超纯水

6）  96孔细胞培养板（Greiner , Cat#650185）

实验设备：

1.       骨形态测量系统

2.       超声波清洗器

操作流程：

1.       破骨细胞接种于（250000 细胞/孔）含和不含颅骨成骨细胞的96孔细胞培养板上（提前孔内放置骨切片）。

2.       细胞在合适的培养基中37℃培养至少14天。

3.       此后，用PBS洗涤细胞两次，在250ul 70%异丙醇中，用超声波高功率处理至少15分钟，使细胞从骨切片脱落。

注意：250ul 70%异丙醇处理使细胞更容易从骨切片脱落。

4.       加入100ul 甲苯胺蓝溶液（1%溶解于水），室温染色2分钟。

5.       用250ul 超纯水冲洗骨切片至少5次，以洗掉切片上的残留物。

6.       吸收坑被染成深蓝色（图1），吸收坑面积可以通过骨测量系统进行量化或者吸收坑可通过光学显微镜观察计数。

产品订购：

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