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Chondrex 快速胶原酶活性检测试剂盒(Collagenase Assay Kits)
背景描述:
胶原酶(Collagenases),基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase, MMP)家族的成员之一,属于内肽酶类,在三螺旋区降解天然胶原,参与结蹄组织的生理和病理周转过程。胶原是动物基质结蹄组织的主要纤维成分。胶原酶可能在肿瘤细胞转移的多个阶段中,对肿瘤细胞侵袭穿透细胞外基质的过程起到促进作用。胶原酶已被支持用于临床治疗杜普征氏掌挛缩(Dupuytren's contracture),佩罗尼氏病(Peyronie's disease)和伤口愈合。
胶原酶活性检测方法很多,传统的方法包括胶原酶谱法(Collagen Zymography),该法首先将样本加入含胶原的SDS-PAGE凝胶中电泳,然后在适当缓冲液中复性12-16h,后染色。当底物被酶降解,在整个黑色的背景中能看到清晰透明的降解条带,从而来判断是否存在胶原酶活性。该方法不仅费力费时,且很可能因复性不*逆转,导致酶活性降低,结果出现较大偏差。
Rapid Collagenase Assay Kit (I) and (II)(Chondrex, Inc)
1. 试剂盒优势
含有测定胶原酶活性的所有必要成分包括重组人MMP-8(用作对照)和两种类型的胶原酶活化剂。
不同于抗体为基础的ELISA试剂盒仅能检测酶蛋白的存在,这些试剂盒目的在于测定酶活性。
试剂盒使用FITC标记的可溶性牛I型胶原或II型胶原为底物,只需2h就能完成测试。
比底物凝胶分析法(酶谱法)快10倍,检测灵敏度比放射同位素标记胶原法更灵敏。
2. 特异性
哺乳动物胶原酶
4. 反应步骤
5. 试剂盒组分
组分名称 | 数量 | 规格 | 保存 |
Reference-recombinant Human MMP-8 | 1 vial | 25µl, 100 units/ml | -80℃ |
Solution A-FITC-Collagen Dilution buffer | 1 bottle | 10ml | 4℃ |
Solution B-Sample dilution and reaction buffer | 1 bottle | 50ml | 4℃ |
FITC-collagen | 1 bottle | 10ml, 1mg/ml in 0.01M acetic acid | -20℃ |
Activator 1-20X APMA | 1 vial | 1ml | RT |
Activator 2-Trypsin | 1 vial | 1mg lyophilized | -20℃ |
Proteinase Inhibitor | 1 vial | 3mg lyophilized | -20℃ |
Enhancer-Elastase | 1 vial | 1mg lyophilized | -20℃ |
Stop solution-o-phenanthroline | 1 vial | 1ml 10mM in ethanol | RT |
Extraction buffer | 2 bottles | 25ml | RT |
ELISA plate black | 2 each | 96 well | RT |
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